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實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:錳過氧化物酶(MnP)測試盒微量法
產品規(guī)格:100管/96樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S6946
產品分類:其它系列
商品介紹:
測定意義: 錳過氧化物酶(EC1.11.1.13)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,主要存在于擔子菌中,屬于木質素降解酶系,能有效的降解木質素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物,疊氮化合物、DTT,多環(huán)芳烴等。 測定原理 錳過氧化物酶在Mn2+存在的條件下,將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚,在465nm有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計、微量石英比色皿、恒溫水浴鍋。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
肝湯 Liver Broth 250g
10g 植酸鈉 Phytic Acid Sodium Salt Hydrate 室溫陰涼保存
50T 人線粒體DNA PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
1 g GSH(抗氧化劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250mL Dextrose Gelatin Veronal DGV Dextrose Gelatin Veronal DGV 常溫保存
100mL 核酸印跡膜染液 Nucleic Acid Membrane Stain 常溫
2 ug PiggyBac 3’LTR PiggyBac 3’LTR 低溫運輸,-20℃保存
假單胞分離瓊脂 Pseudomonas Isolation Agar 250g
1瓶 PRMI 8226 [RPMI-8226]細胞株 PRMI 8226 [RPMI-8226] 低溫運輸和保存
50T 呼吸道細菌多重PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
100µL 山羊抗人IgG(H+L),堿性標記 Goat Anti-Human IgG(H+L),AP -20℃保存
錳過氧化物酶(MnP)測試盒微量法LPL protein 內皮脂肪 規(guī)格: 0.1mlSESN1/PA26 p53調控PA26核蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Interferon alpha 6 干擾素α6抗體 規(guī)格: 0.2mlPol II/RNA polymerase II RNA聚合II抗體 規(guī)格: 0.2ml
C11orf53 11號染色體開放閱讀框53抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PTPRA(Ser180) 磷酸化酪磷酸α抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-YAP1(Tyr407) 磷酸化原基因Yes相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-TNK1 (Tyr277) 磷酸化非受體型酪蛋白激Tnk1抗體 規(guī)格: 0.1ml
C12ORF61 12號染色體開放閱讀框61抗體 規(guī)格: 0.2mlM2-PK/PKM2 小鼠抗丙酮酸激-M2抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF268 鋅指脂蛋白-1c抗體 規(guī)格: 0.1mlBRCC3/BRCC36 易基因復合物亞基蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlADORA1/Adenosine A1 Receptor 苷A1受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Staufen/STAU1 雙鏈RNA結合蛋白Staufen抗體 規(guī)格: 0.2mlβ-Amyloid(1-42) β淀粉樣肽(1-42)抗體 規(guī)格: 0.1ml
HIV1 p55+p17/HIV1 Pr55Gag 艾滋毒抗體 規(guī)格: 0.2mlCIB1 鈣整合素結合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
ADAM19 去整合素樣金屬蛋白19抗體 規(guī)格: 0.2mlARP4 肝管生成素相關蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
BMAL1 芳香烴受體核轉位蛋白樣1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Factor XII 凝因子12抗體 規(guī)格: 0.2ml
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