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簡要描述:草魚呼腸孤病毒型PCR檢測試劑盒價格上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α4(GSTα4)重組蛋白 Recombinant Glutathione S Transferase Alpha 4 (GSTa4)腦紅蛋白(NGB)重組蛋白 Recombinant Neuroglobin (NGB)信號素4B(SEMA4B)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 4B (S
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技術(shù)原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
草魚呼腸孤病毒型PCR檢測試劑盒價格 | Grass Carp Reovirus(GCRV)3RTPCR | BK-P9214 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
臭靈丹二醇 CAS 60132-35-6 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
阿奇 CAS 83905-01-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;100mg
白頭翁皂苷E-1 CAS * 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg
洋艾素 CAS 1362-42-1 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
佛司可林 CAS 66575-29-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
鵝去氧膽酸 CAS 474-25-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
飛薊寧 CAS 29782-68-1 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
靛玉紅 CAS 4 * 規(guī)格: HPLC≥97%;20mg
千層紙素 CAS 480-11-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
1,8-二羥基蒽醌 CAS 117-10-2 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
蒲公英甾醇乙酸酯 CAS 6426-43-3 * 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg
巖大戟內(nèi)酯B CAS 37905-08-1 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
五味子丙素 CAS 61301-33-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
牛蒡苷元 CAS 7770-78-7 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
鴨腳樹葉堿 CAS 4684-32-6 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
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