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簡要描述:錦鯉皰疹病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品硝基化α-突觸核蛋白 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Alpha-synuclein (nitro-Tyr39)磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Phospho-NFKB1 (Ser337)磷酸化谷氨酸受體2A抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Phospho-NMDAR2A (Tyr1325
詳細(xì)介紹
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
錦鯉皰疹病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格 | Koi Herpesvirus(KHV)PCR | BK-P9326 |
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
?
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
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小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
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小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
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小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
錦鯉皰疹病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格麥芽糖孔蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:Maltoporin
膜相關(guān)環(huán)指蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:42069
運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元及胰同源蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:MNX1
磷酸化雙微體2癌基因抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Phospho-MDM2(Thr218)
肌間蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:MYOM1
膜相關(guān)環(huán)指蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:42072
微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:MTTP
磷酸化肝細(xì)胞生長因子受體(原癌基因)抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Phospho-Met (c-Met) (Tyr1003)
黑色素瘤相關(guān)抗原C1抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:MAGEC1
硝基化α-突觸核蛋白 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Alpha-synuclein (nitro-Tyr39)
磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Phospho-NFKB1 (Ser337)
磷酸化谷氨酸受體2A抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Phospho-NMDAR2A (Tyr1325)
老年性癡呆蛋白APH2抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Nicastrin
維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:NAV2
神經(jīng)細(xì)胞分化因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:NeuroD1
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