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簡(jiǎn)要描述:特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。產(chǎn)品名稱:吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測(cè)試盒微量法產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣檢測(cè)方法:微量法產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6526產(chǎn)品分類:氨基酸代謝系列商品介紹:測(cè)定意義:脯是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯代謝因其初始底物不同,分為谷( Glu) 和鳥( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
檢測(cè)方法:微量法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6526
產(chǎn)品分類:氨基酸代謝系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 脯是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯代謝因其初始底物不同,分為谷( Glu) 和鳥( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷為前體合成脯途徑的關(guān)鍵酶,對(duì)植物適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。 測(cè)定原理: 吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷生成P5C過程中分解ATP生成ADP和無(wú)機(jī)磷,通過鉬酸銨比色法測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生無(wú)機(jī)磷的量可確定P5CS活性。 需自備的儀器和用品: 可見外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2 ug pYES2-FLAG pYES2-FLAG 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
50次 柱式真菌DNAout Column Fungal DNAOUT 常溫
2 ug pE-SUMO pE-SUMO 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
cycloheximide 11.25mg/支*5
5g B6 Vitamin B6 室溫保存
50T 轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
48 T 肝/肌糖元測(cè)試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50ML Magnesium Sulfate Solution(溶液),1M Magnesium Sulfate Solution,1M 常溫保存
50次 T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 T3 in vitro Transcription Kit -20℃保存
2 ug pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
測(cè)定培養(yǎng)基 Folic Acid Assay Medium 250g
吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測(cè)試盒微量法Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021) 磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml
HER2 receptor(NT) HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
CAGE1/CT3/CT95 瘤/睪抗原3抗體 規(guī)格: 0.2ml
SOAT2/ACAT2 ?;D(zhuǎn)移2抗體 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
KLHL20 Kelch樣蛋白20抗體 規(guī)格: 0.2ml
GDNF 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
Apg12 自噬相關(guān)蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-2 白介素2抗體(人) 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-EGFR (Thr678) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml
CAS/CSE1 細(xì)胞凋亡敏性基因抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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