細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

?

公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

SW 780(人膀胱移行細胞癌) 5×106cells/瓶×2電介錳，英文名或英文縮寫：Manganese，級別：CP，98%，規(guī)格：25毫克

HIC(人小腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠神經(jīng)干細胞(EGFP標記) 人胚胎，皮膚，肌肉;M-22去氫抗壞血酸 Dehydroascorbic acid 490-83-5 250MG 通用試劑

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0922溴化 litxium bromidq 82017-8-9

PDCD1LG2 Others Cynomolgus 食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 人細胞裂解液 (陽性對照) 羧甲基纖維素shēng huà shì jì容量：2～8℃1克

CM-H082人臍靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mLS,S’-二甲基-N-清基二硫代亞基碳酸鹽NA
SELPLG Others Mouse 小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人細胞裂解液 (陽性對照) 秦皮甲素Esculin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,BR

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0927秦皮素（標準品）Fraxetin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

大鼠肝細胞;IAR20 腎透明細胞腺癌細胞，786-O[786-0]細胞 P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細胞，小鼠骨髓瘤細胞秦皮乙素（標準品）6,7-Dihydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Ishikawa, 人內(nèi)膜癌細胞系 Human秦皮乙素；6,7-二羥基；七葉亭6,7-Dihydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%

AGER Others Mouse 小鼠 AGER / RAGE 人細胞裂解液 (陽性對照) 茄尼醇Solanesol質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR
小鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞RSPO1 Others Human 人 RSPO1 / R-Spondin-1 (aa 1-146) 人細胞裂解液 (陽性對照) 2'-脫氧鳥苷一水合物2'-Deoxyguanosine monohydrate質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CSSTH1 中華鱉心肌來源細胞N2-苯氧基乙?；B嘌呤N2-Phenoxyacetyl Guanine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

T-107B中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL2'-脫氧胞苷-5'-二1酸三鈉鹽(分子生物學級)dCDP, 2'-Deoxycytidine-5'-Diphosphate,3 salt質(zhì)量規(guī)格：>97%,分子生物學級

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞DMPDMP質(zhì)量規(guī)格：BR

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;Mao 人骨骼肌細胞*培養(yǎng)基 100mL沒食子酸月桂酯(>98.5%,BR)Dodecyl gallate質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，